在生命科學研究領域，蛋白質的檢測與分析是探索生命活動機制、疾病發生發展過程以及藥物研發的重要基礎。ECL（Enhanced Chemiluminescence，增強化學發光）超敏發光液（飛克級）作為 Western Blot 實驗中的關鍵試劑，憑借其的發光原理和性能，能夠實現對低豐度蛋白質的高靈敏度檢測，為科研工作者提供精準可靠的數據支持。
一、發光原理
ECL 超敏發光液（飛克級）的化學發光基于魯米諾（Luminol）及其衍生物的氧化反應。魯米諾是一種常用的化學發光試劑，其分子結構中含有氮雜環和苯環，在堿性條件下，魯米諾首先失去一個質子，形成魯米諾陰離子 。當遇到辣根過氧化物酶（HRP）和過氧化氫（H?O?）時，HRP 作為催化劑，催化 H?O?分解產生氧自由基 。氧自由基具有強氧化性，能夠將魯米諾陰離子氧化為激發態的 3 - 氨基鄰苯二甲酸二陰離子。處于激發態的 3 - 氨基鄰苯二甲酸二陰離子不穩定，會迅速躍遷回基態，同時釋放出光子，產生化學發光現象 。
在 Western Blot 實驗中，HRP 通常與二抗偶聯，二抗特異性結合一抗 - 抗原復合物。當 ECL 超敏發光液（飛克級）與膜上的 HRP 接觸時，上述化學發光反應被觸發，發光強度與膜上結合的 HRP 量成正比，而 HRP 量又與目標蛋白質的含量相關，因此通過檢測發光信號強度，即可間接反映目標蛋白質的表達水平 。飛克級 ECL 發光液經過特殊優化，能夠顯著增強發光信號，降低背景噪音，使得低至飛克（fg，10?1?g）級別的蛋白質也能被有效檢測。
二、產品性能優勢
（一）超高靈敏度
ECL 超敏發光液（飛克級）對低豐度蛋白質具有出色的檢測能力。其的配方優化了魯米諾與 HRP 的反應效率，增強了化學發光信號的產生和持續時間 。在實際應用中，即使樣本中目標蛋白質含量極低，該發光液也能產生足夠強的發光信號，滿足科研人員對微量蛋白質檢測的需求。與常規 ECL 發光液相比，飛克級產品能夠檢測到更低濃度的蛋白質，有效拓寬了蛋白質檢測的下限，特別適用于腫瘤標志物研究、神經遞質相關蛋白分析等對靈敏度要求的實驗場景 。
（二）低背景信號
該發光液通過精確調控反應體系中的成分比例和反應條件，有效降低了非特異性發光，從而獲得較低的背景信號 。一方面，優化的緩沖體系能夠減少雜質與 HRP 的非特異性結合；另一方面，特殊的添加劑能夠抑制自發的化學發光反應，避免背景干擾 。在 Western Blot 實驗中，低背景信號使得蛋白質條帶更加清晰，對比度更高，有助于科研人員準確判斷目標蛋白質的位置和含量，減少實驗誤差，提高數據的可靠性。
（三）良好的穩定性
ECL 超敏發光液（飛克級）在儲存和使用過程中表現出良好的穩定性。從儲存角度來看，該發光液通常采用特殊的包裝材料和儲存條件（如避光、低溫保存），能夠有效防止魯米諾等成分的氧化和降解，延長產品保質期 。在使用過程中，發光液對溫度、pH 值等環境因素的變化具有一定的耐受性，即使在實驗操作過程中出現輕微的條件波動，也能保持穩定的發光性能 。穩定的性能確保了不同批次實驗結果的一致性，便于科研人員進行數據比較和分析。
（四）快速發光與長信號持續時間
飛克級 ECL 發光液能夠在短時間內快速產生發光信號，一般在加入發光液后 1 - 5 分鐘內即可達到發光強度峰值，大大縮短了實驗等待時間，提高了實驗效率 。同時，該發光液具有較長的信號持續時間，在數小時內發光信號強度保持相對穩定，科研人員有足夠的時間進行多次曝光和成像，無需擔心信號快速衰減影響實驗結果記錄 。這種快速發光和長信號持續的特性，使得實驗操作更加靈活便捷。
三、實驗應用與操作要點
（一）Western Blot 實驗應用
轉印后處理：在完成蛋白質轉印至膜上后，先用含 Tween - 20 的 Tris - 緩沖鹽溶液（TBST）對膜進行封閉處理，以減少非特異性結合。封閉結束后，用 TBST 洗滌膜 3 - 5 次，每次 5 - 10 分鐘，去除未結合的封閉劑 。
抗體孵育：將膜與一抗在合適的溫度和時間條件下進行孵育，使一抗特異性結合目標蛋白質。孵育結束后，再次用 TBST 充分洗滌膜，去除未結合的一抗。然后將膜與 HRP 標記的二抗進行孵育，孵育完成后重復洗滌步驟 。
發光檢測：按照 1:1 的比例混合 ECL 超敏發光液（飛克級）的 A 液和 B 液，將混合后的發光液均勻覆蓋在膜上，室溫孵育 1 - 5 分鐘，使發光液與膜上的 HRP 充分反應 。隨后，用濾紙吸去多余的發光液，將膜置于保鮮膜中，排出氣泡后固定于暗盒內，使用 X - 光膠片或化學發光成像儀進行曝光檢測 。根據信號強度調整曝光時間，一般從幾秒到幾分鐘不等，以獲得清晰的蛋白質條帶圖像。
（二）操作注意事項
試劑儲存與使用：ECL 超敏發光液（飛克級）應嚴格按照產品說明書要求儲存，通常需避光、低溫（如 4℃）保存，避免試劑反復凍融，防止成分失效 。使用前將試劑平衡至室溫，確保 A 液和 B 液充分混勻后再使用，避免因混合不均影響發光效果。
實驗環境控制：整個實驗過程應盡量在避光條件下進行，減少光線對化學發光反應的干擾。操作時需佩戴手套，防止手上的油脂、蛋白質等雜質污染膜和試劑，影響實驗結果 。
優化實驗條件：不同的樣本類型、抗體濃度和孵育時間等因素都會影響發光效果，建議在正式實驗前進行預實驗，優化一抗和二抗的濃度、孵育時間、發光液孵育時間等條件，以獲得最佳的檢測效果 。同時，注意設置陽性對照和陰性對照，便于準確判斷實驗結果。
儀器選擇與校準：使用化學發光成像儀時，需確保儀器經過校準，保證檢測的準確性和重復性。對于 X - 光膠片曝光，要根據膜的大小和信號強度選擇合適尺寸的膠片，并嚴格按照膠片沖洗流程操作，避免因操作不當導致膠片顯影異常 。
ECL 超敏發光液（飛克級）以其超高靈敏度、低背景、穩定性好等優勢，成為生命科學研究中蛋白質檢測的有力工具。科研人員在使用過程中，嚴格遵循操作規范，合理優化實驗條件，能夠充分發揮該產品的性能，為深入探索蛋白質功能和生命活動機制提供精準的數據支持。
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