環境酸堿度：文中提到 ECL 超敏發光液的發光基于魯米諾 - 辣根過氧化物酶（HRP） - 過氧化氫（H?O?）反應體系，而該反應在堿性條件下進行 。實驗環境中酸堿度的變化，會直接影響反應體系的 pH 值。若環境酸性較強，會破壞魯米諾 - HRP - H?O?反應的堿性環境，干擾氧自由基的產生，阻礙魯米諾的氧化反應，導致發光信號減弱甚至無法產生。例如，在酸性環境中，HRP 的活性可能受到抑制，無法有效催化過氧化氫分解，進而影響整個發光過程，降低發光液的穩定性和檢測靈敏度。

雜質污染：空氣中的灰塵、微生物以及實驗過程中使用的未清潔干凈的器具等引入的雜質，都可能污染 ECL 超敏發光液。這些雜質可能與發光液中的成分發生化學反應，改變其化學性質。如灰塵中的某些物質可能與魯米諾或增強劑發生反應，消耗有效成分；微生物的生長繁殖可能代謝產生影響發光反應的物質。此外，若實驗操作不規范，使樣品中的雜質混入發光液，也會干擾發光反應，導致檢測結果不準確，影響發光液的穩定性 。

儲存容器材質：儲存容器的材質對 ECL 超敏發光液的穩定性也有影響。若容器材質與發光液發生化學反應，可能改變發光液的成分和性質。例如，某些塑料容器可能會釋放出化學物質，與魯米諾或過氧化氫發生反應，降低發光液的性能。因此，通常建議使用化學性質穩定、不與發光液成分反應的容器進行儲存，以保證發光液在儲存過程中的穩定性 。

操作規范：實驗操作過程中的規范程度直接關系到發光液的穩定性和檢測效果。混合 A 液和 B 液時，如果比例不準確、混合不充分或操作緩慢，都會影響發光液的反應效果。如混合比例不當，可能導致反應不充分，發光信號減弱；操作緩慢使發光液長時間暴露在空氣中，會加速其氧化，提前發生反應，降低穩定性。在將發光液覆蓋膜表面時，若操作不當導致膜干燥，會使發光信號不均勻，影響檢測結果的準確性和重復性 。

與其他試劑的兼容性：在實際實驗中，ECL 超敏發光液可能會與其他試劑接觸，若這些試劑與發光液不兼容，會影響其穩定性。比如，在 Western Blot 實驗中，若洗滌緩沖液去除干凈，殘留的緩沖液成分可能與發光液發生反應，干擾發光過程。此外，樣品中若含有與發光液成分反應的物質，如某些還原劑、重金屬離子等，也會對發光液的穩定性和檢測結果產生負面影響 。