樣本采集與保存

• 正確采集：使用無菌、無 RNA 酶的器具采集樣本，確保在采集過程中不引入外源 RNA 酶和雜質(zhì)。例如，在采集細(xì)胞樣本時(shí)，要使用合適的細(xì)胞收集方法，避免細(xì)胞破裂導(dǎo)致 RNA 釋放和降解；對(duì)于組織樣本，應(yīng)迅速將其從生物體中取出，并立即放入液氮或 RNA 保護(hù)液中，以防止 RNA 在常溫下快速降解。

• 妥善保存：采集后的樣本若不能立即進(jìn)行 RNA 提取，需根據(jù)樣本類型選擇合適的保存條件。一般來說，細(xì)胞和組織樣本可在液氮中或 - 80℃冰箱中長期保存；RNA 提取物則需在 - 20℃或 - 80℃保存，避免反復(fù)凍融，以防 RNA 斷裂和降解。

試劑盒選擇與保存

• 選擇正規(guī)產(chǎn)品：從正規(guī)渠道購買試劑盒，確保產(chǎn)品質(zhì)量和批次穩(wěn)定性。檢查試劑盒的包裝是否完好，標(biāo)簽信息是否完整，包括產(chǎn)品名稱、規(guī)格、有效期、儲(chǔ)存條件等，避免使用過期或受損的試劑盒。

• 正確保存試劑盒：按照試劑盒說明書的要求進(jìn)行保存。通常，Invitrogen Qubit RNA IQ Assay Kit 需要在 2 - 8℃避光保存，要確保保存環(huán)境的溫度穩(wěn)定，避免溫度波動(dòng)對(duì)試劑盒中試劑的活性產(chǎn)生影響。

儀器設(shè)備校準(zhǔn)與維護(hù)

• 定期校準(zhǔn)：Qubit 4 熒光計(jì)或 Qubit Flex 熒光計(jì)等檢測(cè)儀器需定期進(jìn)行校準(zhǔn)，以確保其準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。校準(zhǔn)工作應(yīng)按照儀器制造商提供的標(biāo)準(zhǔn)操作流程進(jìn)行，使用標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，確保儀器的檢測(cè)值在規(guī)定的誤差范圍內(nèi)。

• 日常維護(hù)：在日常使用過程中，要保持儀器的清潔，定期清理儀器的樣品槽和光路系統(tǒng)，防止灰塵、雜質(zhì)等影響檢測(cè)結(jié)果。同時(shí)，按照儀器的使用說明書進(jìn)行操作，避免因操作不當(dāng)導(dǎo)致儀器損壞或檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確。

實(shí)驗(yàn)操作規(guī)范

• 試劑準(zhǔn)備：在使用試劑盒前，將試劑從冰箱中取出，平衡至室溫，并輕輕混勻。避免劇烈振蕩，防止試劑中的成分變性或產(chǎn)生氣泡，影響檢測(cè)結(jié)果。

• 樣本處理：在提取 RNA 時(shí)，要嚴(yán)格按照 RNA 提取試劑盒的操作步驟進(jìn)行，確保提取的 RNA 純度高、完整性好。在進(jìn)行 RNA 定量檢測(cè)時(shí)，準(zhǔn)確吸取適量的 RNA 樣本加入到 Qubit RNA IQ 工作液中，避免樣本量的誤差對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生影響。

• 避免污染：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程需在無 RNA 酶的環(huán)境中進(jìn)行，使用無 RNA 酶的槍頭、離心管等耗材，并定期對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)面和儀器進(jìn)行 RNA 酶去除處理。實(shí)驗(yàn)人員要佩戴手套和口罩，防止自身攜帶的 RNA 酶和雜質(zhì)污染樣本和試劑。

結(jié)果分析與驗(yàn)證

• 多次測(cè)量：對(duì)同一樣本進(jìn)行多次測(cè)量，取平均值作為最終結(jié)果，以減少實(shí)驗(yàn)誤差。一般來說，測(cè)量次數(shù)不少于 3 次，且每次測(cè)量之間的偏差應(yīng)在合理范圍內(nèi)。

• 設(shè)置對(duì)照：在實(shí)驗(yàn)中設(shè)置陽性對(duì)照和陰性對(duì)照。陽性對(duì)照使用已知濃度和質(zhì)量的 RNA 標(biāo)準(zhǔn)品，用于驗(yàn)證試劑盒和儀器的正常工作；陰性對(duì)照則使用無 RNA 的溶液，用于檢測(cè)是否存在外源 RNA 污染。

• 與其他方法驗(yàn)證：可將 Qubit RNA IQ Assay Kit 的檢測(cè)結(jié)果與其他 RNA 定量方法，如紫外分光光度法、瓊脂糖凝膠電泳等進(jìn)行比較驗(yàn)證。如果不同方法的結(jié)果一致，則可進(jìn)一步確認(rèn)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性；若結(jié)果存在差異，則需分析原因，可能是樣本問題、實(shí)驗(yàn)操作問題或儀器故障等，必要時(shí)重新進(jìn)行檢測(cè)。